Znana z poprzednich części programu postać Dantego pełni w grze drugorzędną rolę, głównym bohaterem jest natomiast Nero. Wspomaga go niejaka Kyrie, siostra dowódcy Świętych Rycerzy. Fabuła programu luźno nawiązuje do historii pokazanych we wcześniejszych częściach. Sparda (ojciec Dantego i Vergila) jest czczony przez Zakon Miecza jako Legendarny Mroczny Rycerz.

Organizacja ta zrzesza wspomnianych Świętych Rycerzy, do których należy główny bohater. Pewnego dnia staje się on świadkiem rzezi swych towarzyszy dokonanej przez Dantego. Młody rycerz postanawia dopaść zabójcę. Sama rozgrywka polega na prowadzeniu postaci do boju przeciw rozmaitym kreaturom (głównie demonom). Niekiedy napotkać można również wyjątkowo silnych przeciwników wielokrotnie potężniejszych od pomniejszych bestii. Uzbrojeniem Nero są miecz (nazwany Czerwoną Królową) i dwulufowy rewolwer (Błękitna Róża). Dodatkowo bohater korzysta z nadnaturalnych zdolności (Ramię Diabła). Pozwalają one na czasowa przemianę w demona oraz przyciąganie lub rzucanie odległymi wrogami. Dostępny jest również szereg, często skomplikowanych kombinacji ciosów (przykładowo wyrzucenie przeciwnika w powietrze i uderzenie go mieczem nim spadnie).